牛病毒性腹泻病是由黄病毒科瘟病毒属的牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV)(又称为牛病毒性腹泻—黏膜病病毒Bovinc Viral Diarrhea- Mucosal Disee ase Virus，BVD-MDV)引起的，临床上以发热、黏膜糜烂、溃疡、白细胞减少、腹泻、怀孕母牛流产或产畸型胎儿为主要特征。1946年美国人Olafson等**发现并分离出牛病毒性腹泻病毒，1959年Gillespie和Baker鉴定了美国的两株
l 病原学
BVDV是属于20面体，有囊膜的正链RNA病毒，病毒粒子略呈圆形，直径为40～60nm，囊膜表面有10～12nm的环形亚单位。Coggins测定病毒粒子在蔗糖密度梯度中的浮密度为1.13～l.14g/cm3。病毒粒子沉降系数80～90S。病毒在56℃灭活，MgCl2不引起保护作用。病毒在低温下稳定，真空冷冻干燥的病毒可在-60～- 70℃温度下保存多年。病毒对乙醚、氯仿以及pH3.0敏感。
Broulie下1957年在牛原代细胞培养中**分离出BVDV病毒，在这些细胞中复制不引起细胞病变。同年Undedahl等从牛体分离出另一毒株可使细胞出现空泡和溶解。根据BVDV对细胞的致病作用，将其分为致细胞病变型(Cytopathic，CP)和非致细胞病变型(Noncytopathic，NCP)二个生物型。虽然NCP型不能使培养细胞发生可见的细胞病变,但这并不能说明NCP型是非致病性的，己有试验证明，NCP型仍能引起亚临床感染，并且NCP型较CP型更易引起流产现象。
BVDV基因组核酸是单股、正链RNA分子;长约12.5Kb。BVDV基因组山5′NTR区、一个大的开放阅读框架(ORF)和3′端非编码区(3′-NCR)构成。BVDV毒株与猪瘟(HCV)毒株核苷酸序列有约66%同源性，氨基酸约85%同源性。BVDV仅有一种血请型，但BVDV间有显著的遗传和抗原异质性。因此Ridpath J F根据BVDV病毒基因组5′端非翻译区(5′NTR)序列比较将BVDV分成两种基因型，BVDV-I和BVDV-Ⅱ。Cam在进行I型和Ⅱ型牛BVDV实验感染猪体的研究中得出：在整个实验期间，所有猪的食欲、粪便正常，肉眼或病理学检查均来观察到病变，I型BVDV在病毒量一定时，试验组所有猪在不同时期均分离到BVDV；Ⅱ型BVDV试验组在死前样品中未分离到BVDV，死后也只从4头中的1头猪肺中分离到BVDV。
BVDV能在胎牛肾、睾丸、脾、肺、皮肤、肌肉、气管、鼻甲、胎羊睾丸、猪肾等细胞培养物中增殖传代。现在常用牛肾继代细胞株MDBK，也有用鼻甲骨细胞增殖该病毒。
2 流行病学
BVD呈世界性分布，在许多养牛发达**，如美国、新西兰、加拿大等尤其严重。此病感染动物包括牛、羊、猪、骆驼、鹿等。1999年邱昌庆等对山东、河南、河北部分地区肉牛病毒性腹泻病进行血清学调查。调查表明：牛群中BVD抗体阳性平均检出率为46.2%～65%。2004年高存福等对河北省8个大中型奶牛场采集的奶牛腹泻粪样298份进行了检测，结果阳性率为42.6%。Carlsocon诮查发现，与NCP BVDV持续感染牛群相毗邻的两个羊场的5头妊娠38～78d的母羊，因接触BVDV持续感染牛而导致其所生8头羊罹患边界痫。1992年王治才等对新疆等7个地区羔羊腹泻作了BVDV感染调查，平均阳性率为73.6%。Paton等(1994)对英国发生的一起临床及病理学诊断为猪瘟的仔猪进行了血清学检查，结果证明发生的这起猪瘟是由BVDV自然感染猪引起。牛对BVDV感染率**，约70%的2岁以上牛有BVDV抗体，约0.5%～1%的牛具有持续性病毒血症。妊娠牛50～150d感染BVDV，因胎儿免疫系统还未健全而引起免疫耐受，出生后即成BVDV持续感染牛(PI牛)。在对BVDV持续感染奶牛的年龄分布的调查中，Hans Houe发现：在出现临床症状的牛群中，BVDV持续感染年龄为248d，未出现临床症状的牛群中，BVDV持续感染的平均年龄为14d。妊娠后期感染BVDV，出生后呈血清阴性。
BVDV大多数呈隐性感染，持续感染牛可通过鼻涕、唾液、尿液、眼泪和乳汁不断向外界排毒，是BVDV传染的主要来源。病牛急性发热期，血液中含有大量病毒，一般可保持21d，随着中和抗体的出现，血液中病毒逐渐消失，脾、骨、髓、肠系膜淋巴结和直肠组织含毒量较高。野生反刍动物，可经吸血昆虫传播感染BVDV。直肠检查也能引起BVDV传播。Wensvoort等(1988)报道由于应用污染有BVDV疫苗引起了8起猪的BVDV感染。
3 临床症状与病理变化
3.1 黏膜病(Mucosal disease，MD)
是BVDV感染引起的一种**严重的临床类型，发病率低，死亡率高。该病的潜伏期为7～9d，其主要特征为腹泻、脱水、白细胞减少及出现临床症状后几天发生死亡，它是BVD的一种**严重的临床类型，发病率低，致死率高。
3.1.1 急性黏膜病：临床症状为口腔糜烂，严重腹泻，脱水，精神沉郁，食欲减退或废绝，体温升高到40.5～41℃，白细胞减少，有时粪便中还会出现血液斑点。病牛多于发病后1～2周死亡，少数可延至1个月。病理上口腔(黏膜、齿龈、舌和硬腭)、咽部、鼻镜小而浅的不规则糜烂。食道黏膜出血、水肿，有不同形状和大小的不规则烂斑，呈线状纵行排列，如虫蚀样。真胃炎性水肿和糜烂，小肠壁增粗、变厚，小肠腺出血坏死，肠黏膜水肿、卡他性、出血性以及坏死性不同程度的炎症。淋巴结：肿大，切口外翻，有混浊液体流出。有些病例发生蹄叶炎，流泪及角膜水肿，有时见黏膜液化脓性鼻汁。
3.1.2 慢性黏膜症：少数黏膜病病牛在急性期内来死亡而转为慢性，特征是食欲不振，进行性消瘦及发育不良，间歇性腹泻。鼻镜上糜烂，整个鼻镜上糜烂连成一片，但口腔内少发。慢性蹄叶炎、病牛蹄壳长而弯曲，常发生踱行。皮肤多呈皮屑状，以髻甲、颈部和耳后尤为**。出现持续或间歇性下痢，泌乳奶牛的产奶量会显著下降。病程可长达数月，多2～6个月内死亡。BVDV常通过胎盘侵害胎儿，导致孕牛流产或产出先天缺陷的犊牛，**常见的是犊牛小脑发育不全，可见轻度攻击失调或完全无协调和站立的能力。剖检动物呈典型的黏膜病溃疡病变，运动失调的新生犊牛小脑发育不全，两侧脑室积水。
3.2 急性病毒性腹泻
这种类型**为常见，通常发病率高，致死率低。易感性的成牛感染BVDV后大部分呈亚临床型，病牛可能一度出现轻微发热及白细胞减少，单核细胞增生；在6月龄至2岁龄的牛中可能出现急性型，经5～7d潜伏期后，呈现轻度沉郁，厌食、腹泻、口鼻分泌物增多，偶尔可见口腔糜烂或溃疡的病变，奶牛表现产奶量下降；母年怀孕期间急性感染BVDV可引起犊牛持续性感染或早期死亡，重新吸收，流产，先天性异常和死胎；初生犊牛急性感染BVDV主要表现为温和型，被动获得的体液免疫似乎能保护犊牛免遭病毒感染。有些持续感染牛不表现临床症状，没有**的胃肠道黏膜和淋巴组织的肉眼可见及镜检变化，中性白细胞和淋巴细胞机能下降。
3.3 免疫抑制
BVDV可损害机体的免疫机能，增强其他病原体如副流感病毒、传染性鼻气管炎病毒、冠状病毒、轮状病毒、巴氏杆菌、沙门氏杆菌的致病性。BVDV主要侵害消化道及淋巴网状组织。动物感染BVDV后淋巴结及脾脏出现坏死灶,淋巴结皮质及髓区界限消失，以及淋巴组织萎缩。
4 诊断检测
对急性病例可根据发病史、症状及病理变化作出初步诊断。通过采取血液、尿、眼或鼻的分泌物，脾脏、骨髓或肠系膜淋巴结进行病毒分离培养与鉴定，进一步确诊。由于大部分感染BVDV的牛不表现独特的临床症状和病理变化，与牛恶性卡他热、牛瘟及牛传染性鼻气管炎有相似之处，而且引起腹泻和消化道黏膜糜烂或溃疡的疾病很多，所以确诊需进行实验室检查。目前实验室诊断检测BVD的主要方法有：病毒分离、血清学诊断方法、免疫学诊断方法、分子生物学诊断方法等。目前研究、应用较多的是酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应技术。
4.l 酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验是一种检测器官或组织培养物中的BVDV或监测牛群巾BVDV抗体水平及潜伏感染情况的一种良好技术。王新平建立了双抗体阻断ELISA法检测血清中的抗体，其敏感性比中和试验高出5个滴度。由于检测抗体难以作出早期诊断，王新平等又建立了双抗体夹心ELISA检测BVDV，并研制了试剂盒，为本病的诊断提供了一种简便**的方法。Saliki用病毒分离和夹心ELISA两种方法进行试验，共检测408份牛血清样品，病毒分离法检测172份血清阳性，夹心ELISA对这172份阳性样品和236份病毒分离检测阴性的样品进行了检测，结果敏感性为100%，特异性100%。Shannon利用BVDV单克隆抗体建立了抗原捕获ELISA法检测BVDV抗原。Horner对这种方法进行了改善，与PCR、中和试验进行了比较，认为此法更适合大规模检测BVDV抗原。张光辉建立了单克隆抗体双抗体夹心ELISA，试验结果表明这种方法具有良好的特异性、敏感性及稳定性，与病毒分离试验对比结果为阳性符合率86.67%，与中和试验对比结果为阳性符合率93.33%，**病毒检出量为200ng/ml，但这两种方法需要单克隆抗体，费用昂贵，且不易获得。Katz等对147份已知状况的胎牛血清用竞争性阻断ELISA和NT两法进行了试验，结果表明，使用未稀释胎牛血清和稀释的犊牛抗BVDV抗血清得到的结果符合率很高，且不需高纯度抗原。
4.2 聚合酶链反应技术
应用反转录—多聚酶链式反应(Reverse transcnption polymerase chain reaction，RT-PCR)可以高度特异、灵敏、**(24～36h之内**出结果)地检测器官、组织、血清、排泄物、培养细胞中的BVDV，并可与不同的BVDV株或与猪瘟病毒、边界病毒相区别。RT-PCR不仅具有可测定BVDV核酸序列的优点，即使BVDV被灭活,仍可用该方法检测。
Radwan等利用位于BVDV基因保守区3′端设计了一对引物，用反转录酶转录为cDNA，然后运用PCR技术进行特异性扩增，结果得到了BVDV cDNA中的一个250bp的靶序列，用以检测细胞培养繁殖的BVDV标准株和数种非相关的CP和NCP型田间分离株以及临床mL清样品中的BVDV。此法敏感性可达到检测一个克隆的cDNA分子。李立建立了反转录多聚酶链反应方法，根据BVDV NADL株、Oregon C24 V、BVDV地方分离株和猪瘟兔化弱毒疫苗株等不同毒株的RNA进行了提取、反转录、PCR和套式PCR扩增，用外部引物扩增BVDV和猪瘟病毒获得了280bp的片段，用内部引物扩增**次PCR产物，三株BVDV获得19lbp的片段，猪瘟病毒扩增结果为阴性，该方法**可检测到10-1TCID50浓度的病毒。
Kim等对632份样品进行了病毒分离和RT-PCR检测，结果RT-PCR的敏感性达100%，特异性为96.2%。日本学者Vrund等选用BVDV基因的P80区片段作引物，建立了反转录多聚酶链反应方法检测BVDV，用RT-PCR检出了所有供试的17株BVDV株，包括致细胞病变株和非致细胞病变株。从5头患黏膜病、流产或腹泻的牛中采集了40份血清和组织样品，结果RT-PCR法从所有样品中检出了 BVDV，而用病毒分离法从犊牛采集的10份样品没有分离到病毒，说明用RT-PCR法的检出率比病毒分离法更敏感。
Bhudevi用单管荧光PCR对BVDV进行检测的病毒分型，选择双标记荧光探针，两个荧光探针是针对5′端非编码区区分BVDV-I和BVDV-Ⅱ型。这种方法不仅**、特异、敏感，而且可以对病毒RNA定量和分类。
朱沙等根据BVDV 5′端非编码区设计两套引物，建立了反转录巢式PCR，可检测出处于免疫耐受状态机体中 BVDV，并可与猪瘟病毒和羊边界病毒进行区分，为BVDV的检测提供了一种科学方法。杨桂梅等设计合成了两对能分别扩增水泡性口炎病毒VSV(202bp)和BVDV(341bp)基因片段的引物，并对PCR扩增条件进行了优化，建立了二重RT-PCR方法，可同时检测CSV与BVDV病毒，表明这是一种经济、**、特异的方法。
RT-PCR技术具有敏感性高、特异性强、简便**等优点，但由于基因扩增所需的仪器和试剂价格昂贵，引物合成比较困难，目前还不能广泛应用于生产实践。
5 防制
5.1 免疫预防
研究证明，猪瘟兔化弱毒苗对预防BVD有一定的作用。1995年闫高峰等用Oregon C24标准株试制了弱毒冻干苗。但BVDV减毒活疫苗实验条件下对淋巴细胞和嗜中性粒细胞有损害作用，进而发挥其免疫抑制作用，这提示应激牛避免使用减毒活疫苗进行免疫接种。另外，对妊娠母牛不能使用疫苗，因为可能引起流产或难产；低于6月龄的犊牛不能使用疫苗，接种的年龄应在9～12月龄。2004年张光辉研制了牛病毒性腹泻囊素油乳剂灭活疫苗，免疫效果和保护率优于常规灭活苗和弱毒苗。
分子生物学技术的发展和应用，为研制和生产新型BVDV疫苗提供了广阔的前景。如利用BVDV糖蛋白E2(Gp53)具有中和活性的特性而研制成的亚单位疫苗对动物具有良好的保护作用。Bruschke等针对4种抗原性不同的毒株，构建了多价的E2亚单位疫苗属于Ia、Ib和基因Ⅱ型，该疫苗对同源毒株能提供部分保护。Wang等证明了融合C3d的E2亚单位疫苗有**疫苗免疫效果的潜在能力。Nobiron等进行了E2DNA疫苗和使用IL-2、GM-CSF作为免疫佐剂的E2DNA疫苗免疫效力的研究。结果所有小鼠免疫后都产生了较强的体液免疫应答和细胞免疫应答，其中使用细胞因子作为佐剂能加强免疫应答。
据文献报道，重组活载体疫苗由于其高效且具有高度特异性的优点，已经成为研制BVDV新型疫苗的一个热点趋向。Grigera等将E2
基因克隆到水疱性口炎病毒中，重组病毒免疫小鼠后能显著减少病毒感染症状，所产生的中和抗体在体内能持续180 d。Kweon等将BVDV E2基因插入到牛疱疹病毒TK基因上，用重组病毒免疫牛后，产生的中和抗体能显著减弱临床症状的发生。**近有报道，可将穿梭表达载体pMV26l-E2转化到卡介苗中，获得重组卡介苗，说明牛病毒性腹泻—黏膜病病毒E2基因可以成功地在卡介苗中表达。
5.2 药物防治
本病目前尚无**疗法，主要以抗病毒、调节胃肠功能和酸碱平衡、清热、解毒、强心、补液、消炎、止血等对症治疗和综合疗法，并配以中药进行补气、止泻和调理，增强机体内免疫系统活性，**免疫能力，控制继发感染。
病牛应在疫区中加强饲养管理，对症治疗，以减少损失。可选用次酸铋片30g、磺胺二甲啼啶片40g灌服，磺胺首量加倍，2次/d，连用3～5d。氯霉素500万单位，5%葡萄糖生理盐水3000ml，1次静注。也可用活性炭与痢特灵、氟哌酸、痢菌净等口服。配合强心、补糖及维生素C等或菌特灵液，恩诺沙星液肌注或静注。另外可用中药：乌梅、柿蒂、黄连、河子各20g，山楂炭30g，姜黄、茵陈各15 g，煎汤去渣，分2次灌服。
